Testarea PCR (reacția în lanț a polimerazei) este o tehnologie de bază în diagnosticul molecular. Standardizarea proceselor sale de ambalare și testare afectează direct exactitatea și biosecuritatea rezultatelor. Acest articol oferă o perspectivă profesională asupra punctelor cheie de control al calității pe tot parcursul procesului de testare PCR.
Primul pași de primire și pretratare a eșantionului sunt primii pași în acest proces. Laboratoarele trebuie să verifice cu strictețe identificarea eșantionului, condițiile de transport și timpul de depozitare pentru a asigura integritatea eșantionului. La primire, eșantioanele trebuie numerotate și înregistrate într -un cabinet de biosecuritate și sunt supuse procedurilor de procesare pre -, cum ar fi liza și extracția acidului nucleic pe baza tipului de test. În această etapă este necesar un sistem de verificare a persoanelor -}} pentru a preveni contaminarea încrucișată -.
Pregătirea sistemului de reacție PCR trebuie efectuată pe o bancă curată. Operatorii trebuie să poarte echipamente de protecție de nivel 3 și să utilizeze nuclează - consumabile gratuite. Pregătirea reactivilor respectă principiul „fluxului de lucru unidirecțional”, trecând de la zona de pregătire a reactivului în zona de procesare a eșantionului și apoi în zona de amplificare. Controalele negative, controalele pozitive și controalele interne trebuie incluse în fiecare lot de reacție pentru a monitoriza validitatea experimentală.
În timpul fazei de amplificare și testare, instrumentul PCR trebuie să fie pre -- calibrat și parametrii de ciclism de temperatură verificate. Procedura de reacție include de obicei trei etape: denaturarea (94 - 95 grade), recoacere (50-65 grade) și extensie (72 grade). Numărul de cicluri este ajustat pe baza țintei de detectare. PCR cu fluorescență în timp real necesită, de asemenea, monitorizarea pragului de semnal de fluorescență a canalelor specifice.
Analiza și raportarea rezultatelor trebuie să fie efectuate de tehnicieni calificați. Datele brute trebuie revizuite de cel puțin doi profesioniști pentru a confirma morfologia curbei de amplificare, plauzibilitatea valorii CT și respectarea materialelor de control al calității cu standardele. Raportul final ar trebui să includă informații despre metodologia testului, baza interpretării rezultatelor și o declarație a limitărilor de testare.
Întregul proces respectă strict ISO 15189 și specificațiile CDC relevante. Este implementat un sistem de garanție triplă de monitorizare a mediului, întreținere a echipamentelor și instruire a personalului pentru a asigura fiabilitatea și trasabilitatea testării PCR.